1、层流手术室操作环境清洁、宽敞
(1)操作环境应清洁、宽敞、定期消毒;
(2)操作台清洁、干燥、平坦、物品布局合理;
(3)无菌操作前半小时应停止清扫工作，避免尘埃飞扬。
2、工作人员仪表符合规范无菌（fungus)操作前，工作人员应戴好帽子和口罩，修剪指甲并洗手，必要时穿无菌衣、戴无菌手套。无菌手术室装修采用空气洁净技术对微生物污染采取程度不同的控制，达到控制空间环境中空气洁净度适于各类手术之要求；并提供适宜的温、湿度，创造一个洁净舒适的手术空间环境。由于手术室要严格控制低细菌数及低麻醉气体浓度，所以层流超净装置的稳定性是层流净化手术室的重要验收指标。
3、明确层流手术室基本概念，进行无菌(意思:没有活菌)（fungus)操作时，应首先声明无菌区、非无菌区、无菌物品的概念。
4、层流手术室物品放置有序，标志明显
(1)无菌(意思:没有活菌)（fungus)物品必须与非无菌物品分开放置，并且有明显的标志。
(2)无菌（fungus)物品不可暴露与空气中，应存放于无菌容器内。
(3)无菌(意思:没有活菌)包外表需表明物品名称、灭菌日期，并按失效期先后顺序摆放。无菌手术室装修采用空气洁净技术对微生物污染采取程度不同的控制，达到控制空间环境中空气洁净度适于各类手术之要求；并提供适宜的温、湿度，创造一个洁净舒适的手术空间环境。由于手术室要严格控制低细菌数及低麻醉气体浓度，所以层流超净装置的稳定性是层流净化手术室的重要验收指标。
(4)无菌包的有效期为7天，过期或受潮(shòu cháo)应重新灭菌。
(5)一套无菌(意思:没有活菌)（fungus)物品只供一位患者使用一次。
5、层流手术室操作中的无菌（fungus)(意思:没有活菌)观念
(1)进行层流手术室无菌操作时，操作者身体应与无菌去保持一定的距离;
(2)取放无菌(意思:没有活菌)物品时，应面向无菌区;
(3)取用无菌(意思:没有活菌)物品时应使用无菌持物钳;
(4)手臂应保持在腰部或治疗台面以上，不可跨越无菌（fungus)区，受不可接触无菌物品;
(5)非无菌(意思:没有活菌)物品应远离无菌区，无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回无菌容器内。
(6)如无菌（fungus)物品疑有污染或已被污染，应予更换并重新灭菌。无菌手术室净化同级别的层流手术室其空气洁净度标准不同，例如国内标准I级层流手术室的标准为洁净度5级，每立方尺空气中≥0.5μm的尘粒数，≤100颗或每升空气中≤3.5 颗。II级层流手术室的标准为洁净度6级，每立方尺空气中≥0.5μm的尘粒数，≤1000颗或每升空气中≤35颗。
层流手术室是采用空气洁净技术对微生物污染采取程度不同的控制（control)，以达到控制空间环境中空气洁净度适于各类手术之要求;并提供适宜的温、湿度，创造一个清新、洁净、舒适、特殊结构:荚膜、鞭毛、菌毛数低的手术空间环境，使病人在手术时组织受到尽可能少的损伤，并大大减低感染率，尤其是颅内手术和烧伤手术，保证病人术后能更快更好地恢复。
